分光光度计是一类很重要的分析仪器,无论在物理学、化学、生物学、医学、材料学、环境科学等科学研究领域,还是在化工、医药、环境检测、冶金等现代生产与管理部门,都有广泛而重要的应用。紫外可见分光光度计是基于紫外可见分光光度法原理,利用物质分子对紫外可见光谱区的辐射吸收来进行分析的一种分析仪器。
紫外可见分光光计在条件设定时需注意的四个事项:
(1)狭缝宽度
狭缝的宽度太大,入射光的单色性差狭缝的宽度太小,入射光的强度变弱。 狭缝宽度过大或过小会降低灵敏度,但选择误差小时的大狭缝。 一般的选择设备的狭缝宽度琵琶度必须小于测量对象样品的吸收带的半值宽度。 否则测量的吸光度值会变低。 狭缝宽度的选择在减少狭缝宽度时供试品的吸光度消失。 除此之外,对于大部分被测量品种,可以使用2nm的缝制宽度。
(2)测定波长
在定量分析中,为了提高测定灵敏度,入射光的波长选择被测定物的大吸收波长max,如果max有干扰,则可以选择另外一个灵敏度稍低但避免干扰的谱线,因此通过适当选择入射光的波长,提高测定的灵敏度,
(3)空白溶液的选择
空白溶液是用于调节吸光度测定的动作零点即A=0、T=99%的溶液,用于消除溶液中的其他基质成分、吸收单元和溶剂对入射光的反射和吸收所带来的误差。 根据情况,常用空白溶液有以下选择。
只有溶剂空白溶液中的测定对象成分被测定波长吸收,其他成分不被吸收时,可以用纯溶剂空白。
试剂空白显色剂和其他试剂被吸收,被检体溶液不被吸收时,用不添加被检成分的其他试剂空白。
试样空白试样基体有吸收,显色剂和其他试剂没有吸收时,用不添加显色剂的试样溶液空白。
(4)控制适当的吸光度范围
通过控制被测量物的浓度、改变吸收单元的厚度,可以实现吸光度的适当范围,尽可能减小测量误差。 一般吸光度需控制在0.1-0.8的范围内。