分配层析法是根据一种或多种化合物，在两种不相混合的溶剂间的分配来分离物质的方法。相当于一种连续液一液萃取法。在一定温度下，物质同时溶解于两种相接触的不相混合的溶剂中，其中一种溶剂吸收在支持物上，作为固定相，另一为流动相，化合物在两相中的浓度之比是一个常数:分配系数。
 
一、分配层析法的原理： 

    分配柱层析所用仪器，操作过程都与一般吸附柱层析法相同，柱内装满某种粉末状物质的载体，在载体的表面上保持一种液相，这种液相并不移行，故叫固定相，将混合物样品溶液倒入柱内后再用溶剂冲洗，此溶剂移行，故叫流动相。冲洗时由于流动相连续加入，混合物中各成分就一次又一次的在固定相和新的流动相中按分配系数进行多次分配。实质上就是流动相把各成分从固定相中连续提取出来，并向下移动，结果分配系数大的成分移动速度大，分配系数小的成分移动速度小，因而彼此分离。 

    分配柱层析法使混合物分离的基本条件是载体和混合物成分间根本没有任何直接作用。特别是被分离的物质在载体上的吸附作用是极小的。?有了这个条件，如果混合物各成分的分配系数之间又有一定的差别，冲洗层析柱时，就能形成纯物质的各个色层，分离即可。此外，载体对所有的溶剂应没有亲和力。 

二、分配层析法的操作步骤:

1、装柱:分配柱层析的装柱比吸附柱层析麻烦一些，但十分重要，直接影响分离效果。装柱前，将固定相与载体混合，如果用硅胶、纤维素等载体时，可以直接称出一定量固体，再加入一定比例的固定相液体，混匀后按吸附剂装柱法装入。装柱也分干法和湿法两种。应注意的是：因为分配柱层析法使用两种溶剂，所以事先必须先使这两个相互相饱和，即将两相溶剂放在一起振摇，待分层后再分别取出应用。至少流动相应先用固定相饱和后再使用；否则，在以后洗脱时当通过大量的流动相时，就会把载体中的固定相逐渐溶掉．后只剩下载体，就不成为分配色谱了。  
  用硅藻土为载体，加固定相直接混合的办法不容易得到均匀的混合物。为此先把硅藻土放在大量流动相液体中，在不断搅拌下，逐渐加入固定相，加时不宜太快，加完后继续搅拌片刻。有时因局部吸着水分（固定相）过多，硅藻土会聚成大块，可用玻璃棒把它打散．使硅藻土颗粒均匀，然后填充柱管，分批小量地倒入柱中，用一端是平盘的棒把硅藻土压紧压平，随时把过多的溶剂放出。待全部装完后，应得到一个均匀填好的层析柱。流动相通过时的流速与硅藻土所含的水分和固定相有关，水分太多时流动困难。一般每克硅藻土多可以吸着2-3ml水溶液，再多时流动相就不容易通过。  
  
    反相分配柱层析中多用纤维素粉末为支持剂，与固定相混合方法按一般操作。通常是将选好的固定相溶剂与载体拌匀，在布氏漏斗上抽滤除去多余的固定相后，倒入事先选定的流动相溶剂中，剧烈搅拌使两相互相饱和平衡，然后在层析管中加入已用固定相饱和的流动相，按一般湿法装柱。 

2、加样

①如样品能溶于流动相，可用少量流动相溶解，用吸管轻轻沿管壁加于含固定相载体的上端，然后加流动相洗脱；  
②如样品难溶于流动相，易溶于固定相，则可用少量固定相溶解，加少量载体拌匀吸着后装于柱管顶端载体的上端，然后加流动相洗脱； 
③如样品在两相中都不易溶解，则可用其他挥发性溶剂溶解后，拌入干燥的载体，待溶剂挥发除尽后，加适量(样品量的50%-99%)的固定相拌匀，加入柱顶。样品量与载体重量之比为1∶100—1∶1000。

3、洗脱

   用流动相洗脱的方法与吸附层析法相同。但有一点须注意，流动相溶剂在使用前也应以固定相液予以饱和，否则层析过程中固定相的体积会发生变化，平衡条件就被破坏，影响分离效果。

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