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HPLC中常见的异常峰型及其与HPLC色谱柱的关系

2023年05月31日 14:09:47      来源:广州绿百草科学仪器有限公司 >> 进入该公司展台      阅读量:30

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在HPLC分析过程中,由于各种原因,经常会出现一些异常峰形,严重影响分析结果,给实验者带来很大的困扰。在这里介绍了一些常见的峰形状和可能的原因,我们将了解它们是否与HPLC柱有关。

1、无峰值
可能的原因:
a、进样不成功,或样品未溶解在溶剂中,或样品分解变质或样品浓度过低;
b、液相色谱仪本身的问题:泵或检测器故障;
C、流动相选择不当。比如反相硅胶柱,如果流动相极性太大,一些小的极性物质就洗不掉,这些物质残留在柱子里,就不会出峰;
d、探测器不合适。例如,有些产品没有紫外线吸收或吸收很弱,但使用紫外线检测器进行检测。

2、平头峰
可能的原因:
a、样品浓度过大或进样量过大,也是主要原因;
b、液相色谱的检测器设置不正确。

3、负峰
可能的原因:
a、流动相吸收背景值过高;
b、采样过程中有空气进入;
C、样品组分的吸收低于流动相的吸收;
d、所制备样品的溶剂与流动相不一致。

4、肩峰
可能的原因:
a、进样量过大,样品浓度过高;
b、保护柱或柱头堵塞;
C、保护柱或色谱柱被污染或失效;
d、柱头塌陷。

5、分叉峰
可能的原因:
a、溶剂效应:用于溶解样品的溶剂与初始流动相的极性相差太大;
b、保护柱或柱头堵塞;
C、保护柱或色谱柱被污染或失效;
d、柱头塌陷。

6.鬼峰
可能的原因: 鬼峰出现在某个光谱中,做同样的条件后可能不会再出现。有时没有峰值。
a、对于进样阀的残留峰,每次进样后要花足够的时间平衡和清洁系统;
b、样品中存在未知物,改善样品的前处理;
C、如果流动相被污染,更换新的流动相(或更换品牌);尽量准备现用,再次使用时过滤过夜流动相;
d、流道内有小气泡,打开吹扫阀增加流量消除。

7、凸峰
可能的原因:
a、进样量或样品浓度高;
b、溶解样品的溶剂比流动相极性更大;
C、保护柱或色谱柱被污染或失效;
d、如果流动相不合适,更换新的(调整pH值或改变类型、比例等)。

8、拖尾峰
可能的原因:
a、进样量或样品浓度高;
b、如果流动相不合适,更换新的(调整pH值或改变类型、比例等);
C、硅烷醇作用:加入三乙胺,用碱诱导钝化柱增加缓冲液或盐的浓度,降低流动相的pH值,钝化样品;
d、柱内烧结不锈钢失效:更换烧结不锈钢,增加在线过滤器,过滤样品;
e、柱头塌陷或柱效降低:更换色谱柱。

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