一、实验目的

本研究利用固相萃取作为样品前处理方法，HPLC作为分析方法，检测水产品样品中的喹乙醇的残留水平。该方法操作简便，可简化样品前处理过程，减少有机溶剂的使用。

二、实验目标物

喹乙醇（CAS: 23696-28-8）。

三、应用范围

本方法适用于水产品中喹乙醇的检测的HPLC检测及确证。

四、实验材料

biocomma®Copure® MAX 固相萃取柱60mg/3 mL(Cat. No. COMAX360)。

五、实验步骤

1、样品提取

准确称取5 g匀浆鱼肉样品(精确到0.001 g)于50 mL离心管中，加入35 mL甲醇-水溶液(5:95, v/v)，离心管置入摇床中，室温下恒温振荡器振荡速度110 r/min，避光振荡45 min。提取液在3500 r/min下离心10 min，上清液经滤纸过滤，滤液加入10 mL正己烷，充分混匀后，以5000 r/min离心10 min，弃去上层溶液，下层溶液待净化。

2、SPE柱净化

(1) 活化：MAX 固相萃取柱使用前依次使用3 mL甲醇和3 mL水活化。
(2) 上样和洗脱：将待净化的样品清液加入已活化好的固相萃取柱中，以1 mL/min的流速过柱，弃去滤液。用3mL甲醇-水溶液(5:95, v/v)淋洗固相萃取柱，弃去淋洗液，用吸耳球吹出小柱中残留液。用5 mL甲酸-乙酸乙酯溶液(1:9, v/v)洗脱固相萃取柱，收集洗脱液。
(3) 重新溶解：洗脱液于40 ℃氮吹吹干，用2 mL甲醇定容，0.22 μm微孔滤膜过滤，供HPLC上机测试。

3、HPLC条件

设备：Waters Alliance 2695
色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250 mm，5μm )
检测器：Waters 2487 紫外检测器
检测波长：380 nm
流动相：A：甲醇      B：0.1%甲酸水溶液
洗脱方式：梯度洗脱
表1  梯度洗脱条件

流速：1 mL/min
进样体积：20μL

六、实验结果

1、鱼肉中喹乙醇2 mg/kg添加回收结果
表2 鱼肉中喹乙醇2 mg/kg添加回收结果

2、添加水平为2 mg/kg鱼肉中喹乙醇检测色谱图

图1  添加水平为2 mg/kg鱼肉中喹乙醇检测色谱图