溶血性链球菌实时荧光检测系统

Real-time fluorescence detection system for hemolytic streptococcus

2.1产品简介

溶血性链球菌实时荧光检测系统是指通过荧光染料或荧光标记的 特异性探针,对PCR产物进行标记跟踪，实时监测反应过程的仪 器。结合相应的软件可以对产物进行定性和定量分析，计算待测 样品模板的初始浓度。在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧 光信号积累实时监测整个PCR进程。后通过标准曲线对未知模 板进行定量分析,包括TaqMan荧光探针和SYBR荧光染料。PCR 能对特定基因或物种的丰度进行相对定量，比较不同处理或样品间 的差异，如基因拷贝数、表达量来硏究基因表达对处理的响应， 同时可以获得PCR扩增效率等信息.

产品功能

溶血性链球菌实时荧光检测系统是特异性靶基因检测与定量的一体化平 台。快速型实时定量PCR仪将PCR热循环，荧光检测和各种应用分 析软件结合在一起,可以动态观察PCR每一循环各反应管中PCR扩 增产物逐渐增加的情况。PCR实验结束后可以马上得到定量结果, 无需凝胶电泳分析，无需纯化PCR产物，无需进行任何实验操作。

2.2试剂介绍

技术特点：

◆准确可靠，临床双盲对照试验>1000例，结果与金标准测序法比对，结果性大于99%。

◆高灵敏：可检测低至10ng的人基因组DNA。

◆快速：整个检测流程只需3小时。

◆产品仅用于科研简便：试剂盒提供预混好的试剂，使体系配置操作简便。

◆防污染

◆高特异性：双重特异性组成，保证检测结果的特异性和准确性引物与DNA互补链结合必需* 配对，才能延伸。探针特异性与所检测基因的PCR产物配对，在延伸中产生荧光。

产品及特点：

◆ 即开即用，用户只需要提供伴放线放线杆菌样品。

◆ 根据伴放线放线杆菌保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。

◆ 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。

◆ 一管式荧光定量PCR检测，避免后续污染。

◆ 本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。

使用方法：

一、稀释PCR阳性对照(以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)

◆ 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。

◆ 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。

◆ 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR模板稀释液(用带芯枪头，下同)。

◆ 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。

◆ 换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。

◆ 换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。

◆ 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

二、样品DNA的制备

◆ 如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号(浓度为1×10E4 拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝)或第5号(浓度为1×10E5 拷贝/μL，10μL相当于10万拷贝)再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品，则PC和NC的体积也必须是200μL。

◆ 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒兼容。

三、设置qPCR反应(20 μL体系，在样品制备室进行)

◆ 如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复，则反应设置数量相应增加2或3倍。

产品主要参数

主要特点：

可检测固态、液态、表面、膏状、浆状样本;

样本在检测时无需任何的前处理过程，直接丢入检测瓶即可;

可自动控制孵育温度和孵育时间

检测样本只需1ml/1g;同一温度下可同时检测8个样品;

灵敏度高达可检测到1目标微生物;特异性高达99.999%;

独立、持续的检测并记录瓶中的微生物数量(CFU)

简单三个操作步骤，傻瓜型，无需专业操作人员;

仪器便携式，可随时随地进行检测、100%定量分析，并可直接连接电脑出定量分析检测报告。

RVL微生物检测瓶

检测范围：

活细菌总数

大肠菌群/大肠杆菌/大肠杆菌O157, O111, O104...等

肠道杆菌科

铜绿假单胞菌;绿脓杆菌

沙门氏菌

李斯特菌

肠球菌

酵母菌

应用范围：

卫生控制：

-食品(HACCP)

-厨房、工具、表面(HACCP)

-水质

-(CDC)疾病控制、进出口检验检疫

-药品及 化妆品

与我们的生活息息相关，例如：

咖啡馆、餐厅

水源检测、制水厂

分析实验室和HACCP诊断

农产品及相关加工公司

药厂、药房、化妆品厂

环境监测机构

水配送公司

消费者保护团体、工商管理机构

室内空调调节公司

集传统检验方法优点于一身:

-培养皿法

-酶法(β-葡萄糖苷酸酶分析)

-免疫法(抗原搜寻)

-基因法(基因搜寻)

检验样本无需任何前处理

-液态样本，固态样本和表面样本均无需前处理

定性和定量分析

-搭配检测机：100%的定量分析

-肉眼判读：定性或半定量分析

简单便捷

-简单的三个步骤得到检测结果

检验迅速

-是传统检验方法速度的2～5倍

高灵敏性

-可以检测到1目标微生物(理论极值)

高特异性

-特异性高达99.999%(理论极值)

检测瓶就是实验室

-微生物检测瓶随时可用

-未受过严格专业训练的检测人员也可随时随地进行检测

使用后安全丢弃

-和过期药物同样处理

微生物检测瓶尤其能应用于军事、大型展会等等的食品快速检测

(微生物快速检测)

RVL微生物快速检测瓶

微生物快速检测仪RVLM :

-简单、便捷，100%定量分析

-在同一温度下可容纳8个样品。

-可自动控制孵育温度和孵育时间

-独立、持续的检测并记录瓶中的微生物数量(CFU)

使用后无菌处理

-按下RVL微生物检测瓶的瓶盖上方

-放心安全丢弃(与过期药物同样处理)

若没有RVLM微生物检测仪：

-充分溶解混合后，放入恒温器孵育

(在适当温度下孵育适当时间，请查上表)

-肉眼判读定性或半定量分析结果

以大肠菌群为例：

若菌落数>108CFU/ml：2小时内颜色即变成黄色;

若菌落数<102CFU/ml：14小时内颜色不会变成黄色;

若菌落不存在：18小时后颜色仍保持开始颜色

或其他中间色(不变成黄色)

简单三个步骤得到100%定量检测结果：

一步：放入样本

-打开瓶盖，加入11ml无菌水

-放入液态(固态/表面)样本0.1~1.0ml(0.1~1.0g)

-盖紧瓶盖

第二步：摇动瓶子直到溶剂充分溶解或混合

(充分溶解或混合如右图所示)

-若使用振荡器，需时20秒左右;

或用手用力摇，需时2~3分钟左右。

第三步：在适当时间判读结果(请查左表)

-使用RVLM微生物检测仪：

-充分溶解混合后立即放入检测仪

-得到100%定量分析结果