HPLC 柱前衍生法分析黄曲霉毒素 B1

黄曲霉毒素（AFT）对有机体具有致突、致癌、致畸性，被列为可能的人体致癌物质。 黄曲霉毒素在多种人类食物中被发现，如玉米、坚果、花生等等，以 B1、B2、G1、G2 的形式存在。AFTB1 在动物体内可转变成两 种主要代谢产物- AFTM1 和 AFTQ ,前者的毒 性和致癌性与AFTB1相近,主要存在于动物 的尿和乳汁中。

黄曲霉毒素可使用正相和反相液相色谱法分离，反相色谱法操作较容易、流动相毒性也较低，被广泛采用。使用反相液相色谱检测时，可通过柱前衍生法或柱后衍生法，提高AFTB1 、AFTG1的检 测灵敏度 ，使之与 AFTB2、AFTG2 在相近水平下检测。柱前衍生法无需专用柱后衍生反应系统，方法简单。本方法通过三（TFA）柱前衍生，HPLC 检测黄曲霉毒素 B1。该方法可用于 4 种黄曲 霉毒素 B1、B2、G1、G2 同时检测，也可用于 AFTM1 检测。

样品前处理

取 50μL 黄 曲霉毒素 B1 标样溶 液 (10ng/mL，溶剂苯-乙腈溶液(98:2 v/v))，用氮气吹干，加入200μL正己烷和100μL三， 混匀1min，室温下放置10min，氮气吹干，用乙腈水溶液(乙腈/水 85：15 v/v) 50μL重新溶 解，混匀30s，经0.45μm滤膜过滤，供液相色谱仪检测用。

■ LC 分析条件

仪器：Shimadzu LC-20A 液相色谱系统（含 LC-20AT 二元泵、CTO-20A 柱温箱，RF-10AXL荧光检测器，LCsolution 色谱工作站）

色谱分析条件

流动相：甲醇:乙腈:水=1:3:6

流速 ：1.0mL/min

色谱柱：Shim-pack GVP-ODS (4.6mm*10mm)；

Shim-pack VP-ODS (4.6mm*150mm,5μm) 激发波长 365nm

发射波长 425nm 柱温：40℃ 进样量：10μL

■ 分析结果

黄曲霉毒素 B1（AFTB1）标样色谱图及分析结果

表 1 黄曲霉毒素 B1 分析结果

■ 结论

三柱前衍生法可用于 AFTB1 检测，增强其荧光强度，提高检测灵敏度。通过以上实验检测 AFTB1 标样（10ng/mL），未经衍生标液的信噪比为 42，衍生后信噪比提高至S/N=1434